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Se han empleado variantes de la RT del VIH-1 y del VIH-2, silvestres y portadoras de cambios de aminoacido en el subdominio connection, para determinar como influiria su actividad RNasa H sobre el procesamiento de los PPTs.
The well-deserved, as well as sought after, award was given by RNASA to a cohesive, team made up of individuals from three different companies, (Orbital ATK, United Launch Alliance (ULA) and Thales Alenia Space), coming together with innovative solutions to achieve what most in the space launch industry thought to be impossible.
Entre los metodos utilizados como suministro, destacan la inyeccion directa (Posiri et al., 2013), la transfeccion y el consumo de bacterias inactivas libres de RNasa III que sobreexpresan dsRNA, metodo probado exitosamente en nematodos (Caenorhabditis elegans) (Timmons & Fire, 2001) y en camaron (Penaeus monodon) (Sarathi et al., 2008).
Finalmente, el RNA fue removido adicionando 1[micron]L de RNasa e incubando a 37[degrees]C por 1hr.
Las condiciones del PCR fueron las siguientes: Buffer 1x, Mg[Cl.sub.2] (2.5 mM), dNTP's (100 [micron]M c/u), 5 pmol de cada iniciador, Inh RNAsa 6 U, Taq DNA polmerasa 0.75 U y MULV 12 U, muestra 1.0 gl.
coli polimerasa I (New England Biolabs), 200 [micron]M de dNTPs y 1 U de RNasa H (Invitrogen), en un volumen final de 28 [micron]l.
En los virus, el dominio RNAsa H que se encuentra en la transcriptasa reversa (RT) puede introducir espacios o "gaps" cerca del extremo 5" de la hebra molde de RNA despues de que ha sido copiada al hibrido RNA-DNA.
La ECP es un miembro de una subfamilia de ribonucleasas (RNasa), y al igual que con la MBP se han identificado dos isoformas (ECPl y ECP2).
Se ha indicado que el genoma dsRNA de IPNV puede desencadenar apoptosis por activacion de la via PKR que inhibe la traduccion de proteinas celulares, y por la via RNasa L que degrada los mRNA (22-24); mas recientemente, Chiu et al (25), observaron que la proteina VP3 induce la expresion de BAD estimulando apoptosis a traves de la via mitocondrial.
El DNA genomico, potencialmente contaminante de la fraccion de ARN, se elimino usando DNasa I libre de RNasa (Ambion, Austin, TX).